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內(nèi)參cq值一般多少合適（內(nèi)參gapdhct值多大比較好）

發(fā)布時間：2023-04-22 07:29:17 稿源：創(chuàng)意嶺閱讀： 105

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本文目錄:

1、qRT-PCR檢測植物miRNA的表達量，內(nèi)參基因選擇什么最好？可以給出特意反轉錄引物和qRT-PCR的引物嗎？
2、熒光PCR時ct值大于30？
3、小鼠14-3-3 zeta的內(nèi)參基因選什么
4、cq值高應該降低模版濃度嗎

內(nèi)參cq值一般多少合適（內(nèi)參gapdhct值多大比較好）

一、qRT-PCR檢測植物miRNA的表達量，內(nèi)參基因選擇什么最好？可以給出特意反轉錄引物和qRT-PCR的引物嗎？

我知道和使用過的U6內(nèi)參基因只有兩個： RNU6-1和RNU6-2.前一個就是常見的u6，后一個有時被稱為u6b. 在我的大鼠RNA樣本當中，u6表達量有些太高，u6b的Cq值與我的目標miRNA比較接近，穩(wěn)定性也很好。但是這些對植物樣本中的內(nèi)參基因選擇沒有什么指導意義。

為了確定u6在植物中的保守性，比較快捷的辦法是找到談論這個話題的文獻綜述。如果沒有人寫過這樣的綜述的話，就只能靠自己去數(shù)據(jù)庫找到所有序列自己對比了。

關于內(nèi)參基因的選擇，必須實驗確定特定樣本中的表達水平穩(wěn)定，其他文獻中報導的內(nèi)參基因不一定適合你的樣本。做新的課題時，選擇內(nèi)參基因一般是選取3-5個常用的，PCR測試后選取。

這里有applied biosystem一篇非常好的文章討論內(nèi)參基因，里面有很多建議和備選，但都是人和小鼠中測試的。我貼鏈接不方便，麻煩你自己把點和斜換成標點以后使用：

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以上公司的miR PCR是莖環(huán)法，也是我使用過的，兩個引物不在同一個管內(nèi)，兩個步驟也是完全分開先后進行的。暫時沒有看到他們有內(nèi)參和目標基因在同一反應管進行的miR PCR產(chǎn)品，因為他們的PCR探針都用的同一種熒光。如果樓主感興趣RT-PCR一步反應的，并且內(nèi)參能夠與目標miR在同一反應體系進行的產(chǎn)品，還要去咨詢各大廠商。

二、熒光PCR時ct值大于30？

看了你空間里的溶解曲線，你可以看到溶解峰的溫度都很低，全在80以下，你擴出來的東西多半只是引物，你跑定量的時候有做NTC的孔嗎，如果有做，可以對照NTC組和加了模板的組，溶解峰還是一樣的話，那你擴出來的產(chǎn)物100%是引物了。

再有，你的擴增曲線問題，CT太了，一般做定量認為CT=25時，是一個模板擴出來的，所以當大于25擴出來的結果都不可信。

還有，你反轉錄的時候RNA加多少，2微克？，反轉錄體系是多少,20微升？反轉錄之后按照多少比例稀釋，1比4？

總之，問題可以再問詳細一點，也可以直接HI我

如果做過NTC那溶解峰就沒問題了，而且都很單一，特異性蠻好的。沒稀釋的cDNA做的定量，CT大于30？你P的什么基因呢，表達量也太低了吧，內(nèi)參的CT呢，也是這么低嗎

三、小鼠14-3-3 zeta的內(nèi)參基因選什么

我知道和使用過的U6內(nèi)參基因只有兩個：RNU6-1和RNU6-2.前一個就是常見的u6,后一個有時被稱為u6b.在我的大鼠RNA樣本當中,u6表達量有些太高,u6b的Cq值與我的目標miRNA比較接近,穩(wěn)定性也很好.但是這些對植物樣本中的內(nèi)參基因選擇沒有什么指導意義.

為了確定u6在植物中的保守性,比較快捷的辦法是找到談論這個話題的文獻綜述.如果沒有人寫過這樣的綜述的話,就只能靠自己去數(shù)據(jù)庫找到所有序列自己對比了.

關于內(nèi)參基因的選擇,必須實驗確定特定樣本中的表達水平穩(wěn)定,其他文獻中報導的內(nèi)參基因不一定適合你的樣本.做新的課題時,選擇內(nèi)參基因一般是選取3-5個常用的,PCR測試后選取.

這里有applied biosystem一篇非常好的文章討論內(nèi)參基因,里面有很多建議和備選,但都是人和小鼠中測試的.我貼鏈接不方便,麻煩你自己把點和斜換成標點以后使用：

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以上公司的miR PCR是莖環(huán)法,也是我使用過的,兩個引物不在同一個管內(nèi),兩個步驟也是完全分開先后進行的.暫時沒有看到他們有內(nèi)參和目標基因在同一反應管進行的miR PCR產(chǎn)品,因為他們的PCR探針都用的同一種熒光.如果樓主感興趣RT-PCR一步反應的,并且內(nèi)參能夠與目標miR在同一反應體系進行的產(chǎn)品,還要去咨詢各大廠商.

如果你對這個答案有什么疑問，請追問，

另外如果你覺得我的回答對你有所幫助，請千萬別忘記采納喲！

四、cq值高應該降低模版濃度嗎

應該的，cq值高應該降低模版濃度的，因為cq值高降低模版濃度是正常的，也是必須的，所以cq值高應該降低模版濃度

以上就是關于內(nèi)參cq值一般多少合適相關問題的回答。希望能幫到你，如有更多相關問題，您也可以聯(lián)系我們的客服進行咨詢，客服也會為您講解更多精彩的知識和內(nèi)容。