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    內(nèi)參actin（內(nèi)參actin和gapdh）

    發(fā)布時(shí)間：2023-04-19 04:33:11     稿源： 創(chuàng)意嶺    閱讀： 74        

    大家好！今天讓創(chuàng)意嶺的小編來大家介紹下關(guān)于內(nèi)參actin的問題，以下是小編對(duì)此問題的歸納整理，讓我們一起來看看吧。

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    本文目錄:

    內(nèi)參actin（內(nèi)參actin和gapdh）

    一、western blot內(nèi)參抗體actin為什么出了好幾條帶

    首先要確定你的樣品沒有降解，基本上看帶型可以確定，條帶要干凈，沒有拖尾，其次是你的一抗，這個(gè)需要跟別個(gè)同學(xué)做的對(duì)比，這兩個(gè)問題排除后主要就是你的抗體稀釋度了，濃度過高，顯影底物過強(qiáng)都會(huì)出現(xiàn)雜帶，而雜帶跟你每次操作包括洗脫的時(shí)間 孵育的時(shí)間的不同，都可能出現(xiàn)在不同的位置

    二、RT-PCR是，內(nèi)參是什么時(shí)候加入，作用是什么？謝謝

    你說的應(yīng)該是real

    time

    pcr吧，注意rt其實(shí)是逆轉(zhuǎn)錄reverse

    transcription的縮寫，和real

    time一定要分開來。

    常說的qpcr，qrt-pcr，都是通過實(shí)時(shí)（real

    time）的方法，測(cè)定樣品中某個(gè)模版的起始量ct值

    但是呢，由于之前rna提取、反轉(zhuǎn)等步驟，各個(gè)步驟存在不同的效率，ct值并無法真實(shí)反應(yīng)樣品中模版的絕對(duì)量，因此，需要一個(gè)內(nèi)參來做為參考。

    比方說，a基因的ct值，在a樣品中是18，在b樣品中是20，由于a

    b樣品存在rna質(zhì)量等等一系列不同，你無法直接就判斷這個(gè)基因在a樣品中的表達(dá)量是b樣品的4倍。

    這時(shí)候，我們需要一個(gè)內(nèi)參，假如內(nèi)參ct值在a樣品中是14，而在b樣品中是15。由于內(nèi)參的穩(wěn)定性，在不同樣品中被認(rèn)為是表達(dá)量一致的，因此，a基因的在ab樣品之間的-δδct值是1，也就是表達(dá)量為2倍的關(guān)系。

    這里，我們可以知道內(nèi)參的作用，即通過測(cè)量?jī)?nèi)參，可以在后面分析過程中將不同樣品的起始量均一化。內(nèi)參需要選擇在不同樣品中有穩(wěn)定表達(dá)量的基因，這就是為什么內(nèi)參經(jīng)常選擇看家基因的原因。以小鼠為例，常用的內(nèi)參有actin

    gapdh

    hprt等等。

    當(dāng)然，現(xiàn)在的很多觀點(diǎn)認(rèn)為這些基因在不同組織中豐度也不同，例如gapdh，在線粒體含量高的組織中豐度高，很多人認(rèn)為用基因組dna做內(nèi)參會(huì)更加靠譜，當(dāng)然這是后話了，選擇gapdh無礙于現(xiàn)階段的實(shí)驗(yàn)，如果覺得不靠譜，可以選擇兩個(gè)內(nèi)參。

    你所研究的物種，應(yīng)該有人已經(jīng)發(fā)表過相應(yīng)的內(nèi)參，直接上數(shù)據(jù)庫(kù)搜就可以了。

    原創(chuàng)內(nèi)容，碼字不易，萬望采納。

    三、求助水稻的actin 內(nèi)參基因引物

    ACTIN在研究中被發(fā)現(xiàn)最不穩(wěn)定 引物為：

    Forward GAAGATCACTGCCTTGCTCC

    Reverse CGATAACAGCTCCTCTTGGC

    其他較好的水稻內(nèi)參基因?yàn)椋?/p>

    18S rRNA

    Forward ATGATAACTCGACGGATCGC

    Reverse CTTGGATGTGGTAGCCGTTT

    Glyceraldehyde-3-hosphate dehydrogenase

    Forward GGGCTGCTAGCTTCAACATC

    Reverse TTGATTGCAGCCTTGATCTG

    Tubulin

    Forward TACCGTGCCCTTACTGTTCC

    Reverse CGGTGGAATGTCACAGACAC

    出自一下文章：

    《Normalization of reverse transcription quantitative-PCR with

    housekeeping genes in rice》

    你可以上網(wǎng)下載自己好好研究下

    內(nèi)參基因?qū)τ趯?shí)時(shí)定量的結(jié)果非常重要 要慎重選擇

    四、請(qǐng)問內(nèi)參β-actin在血細(xì)胞里面也有表達(dá)嗎？特別是紅細(xì)胞，里面有嗎？

    都表達(dá)，他們的基因都是組成型基因，每種組織都會(huì)表達(dá)。所以紅細(xì)胞里面也有。

    以上就是關(guān)于內(nèi)參actin相關(guān)問題的回答。希望能幫到你，如有更多相關(guān)問題，您也可以聯(lián)系我們的客服進(jìn)行咨詢，客服也會(huì)為您講解更多精彩的知識(shí)和內(nèi)容。


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